Вестник МГТУ, 2022, Т.25, № 2.

Тихонов С. Л. и др. Микрокапсулирование и оценка субхронической токсичности пептидов. заливали экстрагентом в соотношении 3 : 10 (на 30 г замороженного измельченного сырья приходилось 100 мл экстрагента). Для экстрагирования использовали экстрагент с рН 7,0, приготовленный на фосфатном буфере по ГОСТ 4919.2-20161. Экстракцию проводили на холоде при температуре 6-8 °С. Колбы с измельченным сырьем, залитым экстрагентом, устанавливали в шуттель-аппарат. Истинная концентрация белка в экстракте составила 21,53 мг/мл. Затем протеолитическую активность белков определяли в супернатанте, полученном в ходе экстракции на холоде. Определение протеолитической активности проводили в разведениях в 10, 20, 50 и 100 раз следующим образом. В две пробирки - испытуемую и контрольную - вносили по 2 мл 1%-го раствора казеина, помещали их в водяную баню при температуре воды 30 °С на 10 минут. По окончании выдержки в испытуемую пробирку вносили 0,5 мл разведенного супернатанта, а в контрольную - 0,5 мл воды очищенной. Содержимое пробирок перемешивали стеклянной палочкой и ставили на повторную выдержку на 10 минут при той же температуре. По истечении времени в обе пробирки добавляли по 2,5 мл 5%-го раствора трихлоруксусной кислоты для прекращения действия ферментов, содержимое пробирок перемешивали. Выделившийся осадок отфильтровывали самотеком на плотной фильтровальной бумаге. Для полученного фильтрата измеряли оптическую плотность при длине волны X= 280 нм. В качестве раствора сравнения использовали воду очищенную. Количество протеолитических единиц в 1 мл исследуемого раствора А (ПЕ/мл) рассчитывали по формуле A = (Daa - DK) х P x 2, (1) где Daa - оптическая плотность опытного раствора; Dк - оптическая плотность контрольного раствора; P - разведение раствора; 2 - коэффициент пересчета протеолитической активности фермента на 1 мл исследуемого раствора. Результаты исследования представлены в табл. 1. Таблица 1. Результаты исследования протеолитической активности экстракта фабрициевой сумки цыплят-бройлеров Table 1. Results of studying the proteolytic activity of the extract of the broiler chickens' fabricius bursa Разведение Протеолитическая активность, ПЕ/мл 10 4,68 20 4,32 50 5,4 100 4,8 Среднее значение 4,8 Затем экстракт дополнительно ферментировали трипсином из расчета 50 мг/л в течение 6 часов при температуре 36 °C и рН 7,8, проводили гельфильтрацию на жидкостном высокоэффективном хроматографе Agilent 1260 Infinity II с применением сорбентов Sefadex G-10 и Sefadex G-25. Молекулярное распределение фракций пептидов в экстракте фабрициевой сумки, установленное методом гельфильтрации, следующее: менее 18 кДа - 7 %, 18-27 кДа - 82, более 27 кДа - 11 %. Микрокапсулирование пептидов проводили на опытной установке, основой которой являлся аппарат с псевдоожиженным слоем, путем нанесения на поверхность пептидов 10%-го раствора мальтодекстрина МД 6 (ГОСТ 34275-20172, производитель ООО "НьюБио") (рис. 1). Опытная установка для проведения микрокапсулирования пептидов представляет стеклянный корпус модельного аппарата конической формы 2, в нижнюю часть которого подавался воздух вентилятором 6. Протеолитические пептиды 1 засыпали в корпус аппарата на пористую перегородку 5. Путем изменения напряжения (автотрансформатором) питания вентилятора устанавливали скорость воздуха, обеспечивающую образование псевдоожиженного слоя в виде фонтанирующих потоков. Размеры конуса корпуса аппарата позволяют наносить покрытия разных по размеру частиц и исключить их унос. После установления фонтанирующего режима включался компрессор 4 диспергатора жидкого компонента 3 (рис. 1). 1ГОСТ 4919.2-2016. Реактивы и особо чистые вещества. Методыприготовления буферных растворов. М., 2018. 2 ГОСТ 34275-2017. Сетки из стекловолокна щелочестойкие армирующие фасадные. Метод определения механических свойств. М., 2019. 210