Вестник МГТУ, 2022, Т.25, № 2.

Вестник МГТУ. 2022. Т. 25, № 3. С. 168-182. DOI: https://doi.org/10.21443/1560-9278-2022-25-3-168-182 Материалы и методы Объектом исследований является ферментативный гидролизат лимфоидной ткани цыплят-бройлеров. Он представляет собой непрозрачную водную суспензию со слабым специфическим запахом, которую используют с целью повышения иммунитета у птиц. Для проведения эксперимента ферментативный гидролизат лимфоидной ткани цыплят-бройлеров использовали в следующих концентрациях: 1, 5 и 10 %. Выделение альвеолярных и перитонеальных макрофагов Материалами эксперимента послужили альвеолярные и перитонеальные макрофаги, выделенные из брюшной полости и бронхоальвеолярной лаважной жидкости крыс линии Wistar массой тела 180-210 г. Перитонеальные и альвеолярные макрофаги получали по стандартной методике. В перитонеальную область производили инъекцию 3,5 мл охлажденной культуральной среды RPMI-1640 и 1,5 мл воздуха (Поздина и др., 2018). Отсасывание суспензии производили 5-миллилитровым стерильным шприцом. Из бронхоальвеолярной жидкости альвеолярные макрофаги получали методом альвеолярного лаважа при использовании теплого раствора Хэнкса в объеме 3-4 мл. Полученные суспензии клеток центрифугировали в течение 5 мин. В результате образовывалась надосадочная жидкость, которую отбрасывали. Клеточный осадок повторно суспензировали в 5 мл культуральной среды и разливали по 0,5 мл на покровные стекла в 6 -луночный планшет. Далее клетки выдерживали в инкубаторе с концентрацией углекислого газа, равной 5 %, при температуре 37 °С. Затем клетки промывались раствором Хенкса, после этого в лунку планшета заливалась культуральная среда RPMI-1640. Клетки повторно инкубировали в условиях углекислой газовой среды. Далее исследовали морфометрические показатели, жизнеспособность и фагоцитарную активность макрофагов. Определение жизнеспособности клеток Для определения жизнеспособности использовали витальный краситель трипановый синий. Подсчет живых и погибших клеток производили в камере Горяева, предназначенной для подсчета количества клеток в заданном объеме жидкости. Камера представляет собой монолитное 7-предметное стекло, разделенное бороздками, с углублением (0,1 мм) в центральной части. На дне углубления нанесена микроскопическая сетка, расчерченная на большие (0,4 х 0,4 мм), средние (0,2 х 0,2 мм) и малые (0,05 * 0,05 мм) квадраты. Количество клеток в 1 мл 3 на 25 квадратах вычисляется по формуле N 25 = A х 250 х V х K / 25 = A х 2 х 10 4, ( 1 ) где N - число клеток в 1 мл3; А - число клеток в одном большом квадрате камеры Горяева; V - объем суспензии; К - коэффициент разведения. Количество клеток по всей сетке вычисляется по формуле ^ ет = A х 1111 х 2. (2) Подсчет индекса жизнеспособности (ИЖ) произведен по формуле ИЖ = количество живых клеток х 100 % / N25. (3) Суспензии клеток вносили на предметные стекла, фиксацию производили посредством этилового спирта, окрашивание происходило по методу Романовского - Гимза. Определение ядерно-цитоплазматического отношения Для определения морфологических показателей были получены данные о площади клетки, ее ядер и цитоплазмы, и вычислено ядерно-цитоплазматическое отношение (ЯЦО). Ядерно-цитоплазматическое отношение между площадью цитоплазмы и площадью ядра живой клетки рассчитывали по формуле ЯЦО ^ядра / ^цитоплазмы, (4) где ЯЦО - ядерно-цитоплазматическое отношение; 5'ядра- площадь ядра живой клетки; Зцщошизмы- площадь цитоплазмы. Определение адгезии клеток С целью определения адгезии клеток использовали такие показатели, как индекс распластанности (ИР) и индекс прикрепления (ИП). Данные индексы определяли по следующим формулам: ИП = количество клеток, прикрепившихся к стеклу х 100 % / количество клеток, нанесенных на стекло; (5) ИР = число клеток с отростками х 100 % / общее число клеток на стекле. ( 6 ) 173