Вестник МГТУ. 2015, №1.

Значения скорости и константы скорости реакции ферментолиза, рассчитанные по уравнению 1-го порядка (1), приведены в табл. 4. Новиков В.Ю. и др. Кинетические закономерности ферментативного... Таблица 4. Значения скорости [Г-104, г/(л-с)] и константы скорости (/с,-104. с ') реакции ферментолиза в текущий момент времени /, осуществленного с помощью разных способов введения гепатопанкреатина Способ внесения фермента 0-0.5 ч 0.5-1 ч 1-1.5 4 1.5-2 ч 2-2.5 ч Со Ау f 30 а -2 f 60 А’з ^90 а 4 ' 120 А’5 Одноразовый 4.77 1.75 2.14 0.57 1.76 0.42 1.61 0.35 1.47 0.30 Многократный 4.77 1.75 5.57 1.27 5.20 0.99 5.45 0.87 5.29 0.78 Очевидно, что константа скорости Ау на начальном временном участке и начальная скорость Г0 реакции, катализируемой гепатопанкреатином, при фиксированном количестве фермента и субстрата одинаковы в обоих случаях. При использовании одноразового способа внесения ферментного препарата скорость реакции со временем падает и практически стремится к нулю через 6 ч гидролиза. Максимальная степень гидролиза составляет 40-45 %. В случае многократного внесения фермента скорость реакции в зависимости от времени понижается по сравнению с начальной, но незначительно. Как видно из рис. 1, она немного увеличивается при каждом внесении фермента (через 30 мин). Максимальная степень гидролиза через 6 ч может достигать 65-70 %. Основной причиной уменьшения скорости гидролиза во времени, очевидно, является снижение активности ферментного препарата, что обусловлено уменьшением концентрации гепатопанкреатина в смеси при его автолизе (Мухин, Новиков, 2001), а также его дезактивацией при температуре инкубационной среды. Нарастание содержания аминного азота хорошо коррелирует с изменением во времени молекулярно-массового состава белковых фракций в гидролизате. 4. Изменение молекулярно-массового распределения белковых фракций в гидролизате Фотография полиакриламидного геля (рис. 2) иллюстрирует разделение белковых фракций по молекулярной массе в белоксодержащем субстрате до гидролиза (дорожка 3) и в гидролизатах, полученных при разной продолжительности реакции гидролиза (дорожки 4 и 5). Присутствуют также стандартные маркеры (дорожки 1 и 2). Рис. 2. Электрофореграмма разделения белковых фракций по молекулярным массам: 1 - низкомолекулярные стандартные маркеры; 2 - высокомолекулярные стандартные маркеры (Pharmacia Biotechy, 3 - негидролизованное белоксодержащее сырье (отходы трески); 4-6 - гидролизаты, полученные в различные периоды времени: 1 мин (4); 15 мин (5); 30 мин (6) Белоксодержащее сырье (отходы переработки трески) представляет собой соединения белковой природы, молекулярная масса которых находится в пределах от 10 до 250 кДа. В течение первых 10 мин гидролиза молекулярная масса белковых фракций резко уменьшается. Как показывают данные ПААГ- электрофореза, по истечении 30 мин в гидролизате присутствуют только низкомолекулярные белковые фракции молекулярной массой менее 30 кДа. 104