Вестник МГТУ. 2015, №1.

ВестникМГТУ, том 18, № 1, 2015 г. стр. 100-109 Аминокислотный анализ и определение содержания свободных аминокислот в гидролизате выполняли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на хроматографе Z.-8800 (Hitachi, Япония). Анализ проводили в стандартном режиме анализа белковых гидролизатов, используя высокоэффективные ионообменные хроматографические колонки и специальный нингидриновый реагент для детектирования элюирующихся аминокислот. Разделение аминокислот осуществлялось на ионообменной колонке с использованием ступенчатого градиента натрий-цитратных буферных растворов возрастающего pH (Moore et al., 1958; Pivnenko et al, 1997). Размер частиц в водных растворах (дисперсиях) гидролизатов определяли методом квазиупругого рассеяния света (фотонной корреляционной спектроскопии) на приборе Malvern ZetasizerNanoZS (Malvern Instruments Ltd, США); источник света - гелий-неоновый лазер (л = 633 нм), мощность источника света 5 мВт. Содержание микроэлементов в белоксодержащем субстрате определяли методом атомно­ абсорбционной спектроскопии на атомно-абсорбционных спектрофотометрах. 1. lnalvst-800 (Perkin Elner, США) и АА^-ЗО (Carl Zeiss JENA, Германия). Пробоподготовка образцов для анализа включала сушку образцов в электрической муфельной печи при t = 105 °C до постоянной массы и последующее разложение с использованием системы микроволновой подготовки проб Speedwave Four (Berghoff, Бельгия) при t = 200 °C и Р = 40 бар в течение 40 мин. 3. Влияние способа внесения фермента на кинетические параметры реакции гидролиза Эффективность гидролитического расщепления белков (степень гидролиза) оценивали по накоплению аминного азота в гидролизате. На рис. 1 представлена зависимость содержания аминного азота от продолжительности процесса ферментативного гидролиза при различных способах внесения ферментного препарата: однократном (кривая 1) и многократном - через каждые 30 мин (кривая 2). Первоначально обработку экспериментальных данных (рис. 1) проводили в рамках формальной кинетики, предполагая, что реакция ферментелиза является реакцией 1-го порядка (по продукту реакции - аминному азоту), в ходе которой фермент не расходуется. Формально реакция ферментативного гидролиза может быть описана кинетическим уравнением 1-го порядка, поскольку один из реагентов (вода) находится в избытке и его концентрация практически не меняется в ходе реакции. При этом увеличение концентрации аминного азота во времени описывается уравнением C ^ = C OA(l-e~ l'f) ИЛИ - - СЛ4 ) + 1пСол = - где к - константа скорости реакции, с 1; t - время, с. Формула с учетом поправки на содержание аминного азота в негидролизованном сырье имеет вид: t; )_ 1 1 J’ I’1 I - 1 _ J2 (1) Время, г Рис. 1. Накопление аминного азота в гидролизате в зависимости от времени гидролиза белоксодержащего сырья при внесении гепатопанкреатина: 1 - одноразовом; 2 - многократном: количество фермента при каждом внесении - 6 г/(кг сырья); t = 50 °C; pH 7.5 103