Труды КНЦ вып.4(ХИМИЯ И МАТЕРИАЛОВЕДЕНИЕ) вып. 3/2020(11)

choline chloride. The presence of choline chloride makes it difficult to determine the antioxidant activity of DES ­ based extracts by the phosphomolybdate method since an insoluble complex is formed during the reaction. The aim of this work is to modify the phosphomolybdate method for determining the antioxidant activity of DES-based extracts by adding acetone to the mixture to transfer the resulting complex into solution. Keywords : deep eutectic solvents, antioxodant activity. Антиоксиданты — это вещества, замедляющие или предотвращающие свободнорадикальные окислительные процессы, происходящие в живом организме. К природным антиоксидантам относятся витамин С (или аскорбиновая кислота), мочевая кислота и её соли (ураты), витамин Е, в-каротин, полифенольные соединения и другие вещества [1]. Поскольку в основе действия многих биологически активных веществ (БАВ) лежит уменьшение влияния окислительного стресса на организм, в число значимых характеристик растительных экстрактов входит антиоксидантная активность. Одним из методов определения антиоксидантной активности веществ является фосфомолибдатный метод [2], который основан на восстановлении Mo (VI) в Mo (V) с последующим формированием окрашенного комплекса в кислой среде. В классической методике аликвоту экстракта смешивают с реакционным раствором (0,6 М серной кислоты, 28 мМ фосфата натрия и 4 мМ молибдата аммония). Смесь термостатируют при 95 °С в течение 90 мин. После охлаждения смеси до комнатной температуры спектрофотометрически измеряется экстинция при 695 нм. Раствор сравнения содержит реакционный раствор, смешанный с аликвотой растворителя, который использовался для получения экстракта и его термостатируется в тех же условиях, что и образец. Для определения концентрации окрашенного комплекса предварительно строится градуировочный график с использованием растворов аскорбиновой кислоты известных концентраций. Одним из перспективных способов экстракции БАВ из растительного материала является экстракция с применением глубоких эвтектических растворителей (deep eutectic solvents, DES). DES состоят, как правило, из двух компонентов, смешанных в определённых молярных соотношениях [3]. Компоненты DES, образуя эвтектическую смесь, способны связываться друг с другом посредством водородных связей. Один из компонентов выступает в роли акцептора водородной связи, а второй — донора. В качестве акцептора водородных связей, как правило, используются четвертичные аммониевые соли, например хлорид холина. В качестве донора могут выступать органические кислоты (малоновая, лимонная и т. д.), многоосновные спирты (например, глицерин), мочевина и другие соединения. DES характеризуются температурой плавления ниже 100 °С, что гораздо меньше, чем у индивидуальных компонентов [4-6]. Классический фосфомолибдатный метод невозможно применять для определения антиоксидантной активности экстрактов на основе DES, поскольку хлорид холина образует в ходе указанной реакции нерастворимый в воде комплекс. Однако в ряде работ указано, что такой комплекс растворим в смеси ацетона с этанолом [7]. Цель работы — разработка модификации фосфомолибдатного метода определения антиоксидантной активности экстрактов на основе DES, содержащих хлорид холина. В работе были использованы дигидроортофосфат калия KH 2 PO 4 и четырехводный молибдат аммония (NH. : ) : \loO4H<) (оба реагента с чистотой более 99 %, «Вектон», Россия), концентрированная серная кислота (концентрация кислоты более 94 %, «НеваРеактив», Россия), аскорбиновая кислота (чистота более 99,7 %, HUGESTONE, Китай), медицинский этаноловый спирт (96 %, RFK Company, Россия), дистиллированная вода. Для приготовления DES использовались хлорид холина (99 %, RONGSHENG BIOTECH), малоновая кислота (99,5 %, Chemical Line) и глицерин (99,0 %, Vekton). DES приготавливали путём смешения необходимого количества реагентов (хлорид холина : малоновая кислота в соотношении 1 : 1; хлорид холина : глицерин в соотношении 1 : 2) и нагревания их до 80 °С с периодическим перемешиванием. Поскольку чистые DES имеют достаточно высокую вязкость, их смешивали с водой в соотношении 1 : 1 по массе. Для разработки метода были приготовлены градуировочные растворы аскорбиновой кислоты с концентрациями 100-1000 мкг/мл в смесях DES, хлорида холина и малоновой кислоты, а также хлорида холина и глицерина, разбавленных водой. Для спектрофотометрических измерений использовался фотоколориметр КФК-3 (ЗОМЗ). Было опробовано две модификации фосфомолибдатного метода. 143