Труды Кольского научного ценра РАН. № 2, вып.11. 2020 г.

Материалы и методы Объектами исследования служили кабаны Suss crofa разного пола в возрасте от полугода до 5 лет, обитающие в Лахденпохском районе Карелии. Обследовано 21 животное (0,5 года п = 3; 1 год п = 1; 2 года п = 9; 3 года п = 1; 4 года п = 4; 5 лет п = 3). Полугодовалые особи — это поросята, половая зрелость у молодых кабанов наступает в возрасте 1,5-2,5 лет. Отбор биологического материала проводили у кабанов, легально добытых в период охоты с августа по ноябрь 2018 г. Образцы тканей отбирали в течение 2-4 часов после гибели животных, замораживали и хранили до анализа при температуре -80 °С. В пробах печени, почек, сердца и скелетной мышцы анализировали: активность антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы; уровень восстановленного глутатиона (GSH) (спектрофотометрически); содержание а-токоферола и ретинола (методом ВЭЖХ — высокоэффективной жидкостной хроматографии). Для определения активности антиоксидантных ферментов и содержания белка готовили гомогенаты тканей в 0,05 М фосфатном буферном растворе с pH 7,0. После центрифугирования при 6000 g в течение 15 минут в полученных супернатантах спектрофотометрически измеряли активность ферментов: СОД — по модифицированной адренохромной методике [Misra, Fridovich, 1972]; каталазы — по количеству разложенной Н 2 О 2 [Bears, Sizer, 1952]. За 1 условную единицу активности СОД принимали количество фермента, способное затормозить реакцию автоокисления адреналина на 50 %, за 1 единицу активности каталазы — количество микромолей Н 2 О 2 , разложенной за 1 минуту. Содержание белка определяли по методу Лоури [Protein..., 1951] с использованием бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта. Удельную активность антиоксидантных ферментов рассчитывали на 1 мг белка. Содержание GSH определяли по методу Эллмана [Sedlak, Lindsay, 1968] и выражали в микромолях на 1 г ткани (мкмоль/г). Для этого готовили гомогенаты тканей органов в 0,02 М этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА)-Ыаг. после центрифугирования (в течение 15 минут при 5000 g) к супернатантам добавляли 50 %-ю трихлоруксусную кислоту (ТХУ) для осаждения белков, затем вновь центрифугировали (15 минут при 3000 g). В полученных супернатантах после добавления 0,4 М трис-буферного раствора и реактива Эллмана (pH полной реакционной смеси составлял 8,0) спектрофотометрически (X = 412 нм) определяли уровень GSH. Для анализа содержания витаминов навески тканей (по 100 мг) гомогенизировали в 0,25 М растворе сахарозы (pH 7,4), содержащей 0,001 М этилендиаминтетрауксусной кислоты. В конические полиэтиленовые пробирки вносили 0,25 мл гомогената, добавляли 0,25 мл 0,025 % раствора бутилокситолуола в этаноле, тщательно смешивали содержимое пробирки для осаждения белков, затем добавляли 0,5 мл 0,0125 % раствора бутилокситолуола в н-гексане, встряхивали в течение 5 минут, центрифугировали 10 минут при 3000 g и оставляли образцы на холоде на 40 минут. В гексановом слое на микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром 6» с УФ-детектором определяли концентрации а-токоферола и ретинола. Элюентом служила смесь гексана с изопропанолом в соотношении 98,5:1,5. Для построения калибровочных кривых использовали стандартные растворы ретинола и а-токоферола (Sigma, США). Исследования выполнены на научном оборудовании Центра коллективного пользования ФИЦ «Карельский научный центр Российской академии наук». 85