Мурманский морской биологический институт. Труды Мурманского морского биологического института. Вып. 5 (9) / Акад. наук СССР. - Москва ; Ленинград : Изд-во Акад. наук СССР,1964.

А Н Т И М И К Р О Б Н Ы Е СВОЙС ТВА В О С П А Л И Т Е Л Ь Н О Г О ОЧА ГА М АН Т ИИ МИД И И 233 МЕТОДИКА 15 мантию мидии вводилось стерильное инородное тело, вокруг которого развива лось воспаление. Через определенные промежутки времени инородное тело и звлека лось из тканей мантии и помещалось на агаровые пластинки, засеянные тест-микробом. Ііа местах контакта его с тест-микробом в случае наличия в очаге воспаления анти биотических субстанций образовывались зоны отсутствия роста. Всего было поставлено четыре серии опытов, не считая предварительной, о которой будет упомянуто особо. Некоторые изменения в проведении опытов различных серий объясняются тем, что дан ная работа носит в основном методический характер. Т а к же к ак и в ранее проведенных исследованиях морфологии воспалительного процесса у мидий (Михайлова, Праздников, 1961, 1962), в данной работе в качестве инородного тела была использована стерильная хлопчатобумажная ннтка, пропитан н ая взвесью кармина (причем в части опытов кармин но применялся). Использовались хлопчатобумажные нитки № 80, которые наматывались небольшими отрезками на пред метные стекла и кипятились в дистиллированной воде, дважды сменяемой, затем вы сушивались. Нитки вдевались в хирургические иглы (трехгранпые, глазные, изогну тые № 1), оба конца вдетой нитки оставлялись одинаковой длины, примерно 4 см и скручивались между собой, а затем пропитывались кармином. Иглы с вдетыми нитями стерилизовались сухим жаром при 180° в течение 20 минут. Во всех опытах в каждую мидию вводилась одна двойная ннтка. В первых двух сериях введение ниток в ткани мантии проводилось при строгом соблюдении правил асептики. Подготовка подопытных моллюсков к операции заключалась в следующем. Одна створка раковины над будущим местом введения нити слегка подрезалась (на протяжении 1— 1.5 см). Перед этим мантия створки осторожно отделялась от обрезываемого к р а я раковины. Мидии трехкратно промывались стериль ной морскоіі водой. Место введения иглы в мантию обеззараживалось раскаленным стальным предметом. Стерильным иглодержателем игла с ниткой вводилась в утолщен ный край мантии нетравмнрованной створки, в области ее нижней трети, на протяже нии примерно одного сантиметра. Опытные моллюски содержались в аквариуме с п р о точной морской водой. В третьей и четвертой сериях экспериментов предварительное обеззараживание тканей мантии не производилось, мидии промывались нестерильной морской водой. Нитки с кармином вводились только мидиям, предназначенным для гистологического анализа. Возможное действие кармина и самих ниток на Sarcina lutea и другие микробы, используемые в опытах, было проверено специальными опы тами, показавшими, что кармин и хлопчатобумажная нитка, не бывшие в контакте с тканями мидии, не оказывают влияния на характер роста наших тест-микробов, хотя рост некоторых других микробов (например, Bacl. proteus) и угнетался кармином. Во всех четырех сериях опытов извлечение ниток из мантии производилось оди наково. Лезвием безопасной бритвы раковина моллюска разделялась на две половины. Выступающие из тканей концы нитки отрезались на уровне 0 .5—1 мм от поверхности мантии. Затем раскаленным на спиртовке стальным предметом оставшиеся концы ни ток и прилежащие ткани прижигались. Нитка и звлекалась стерильным глазным пин цетом и переносилась на чашку Петри с рыбо-пептонным агаром (1’ГІА), засеянным тест-микробом глубинным методом. Питательный агар (РПА) инфицировался взвесью культуры тест-микроба из расчета 1 млрд клеток на 100 мл агара (по бактериальному стандарту мутности). Глубинный метод засева питательной среды дает возможность получить совершенно равномерное распределение колоний тест-микроба по всей толще агаровой пластинки. Это обстоятельство особенно важно при выявлении антибиотического действия таких мелких объектов, как нитки, извлеченные из очага воспаления в мантии мидии, ко торые вызывают образование сравнительно небольших зон отсутствия роста. При по верхностном посеве бактерий распределение их менее равномерно, вследствие чего образовавшиеся разрежения можно принять за зоны отсутствия роста. Такого рода затруднение мы испытали в самом начале пашей работы, когда, но предложению Е. В. Праздникова, использовали стерильную хлопчатобумажную нитку для выявле ния антибиотической активности очага воспаления. Бо л ьш ая часть наших опытов проведена с Sarcina lutea. В первых сериях опытов использовались 5—10-суточные культуры бактерий, к а к более чувствительные к дей ствию антибиотических веществ (Красильников, 1958). Однако в дальнейшем опыты проводились с суточными культурами, давшими вполне удовлетворительные резуль таты. Инкубация производилась при 30—35°. В первых сериях опытов перед инкуба цией чашки Петри с нитками выдерживались в течение суток прп пониженной темпе ратуре (6°). Предполагалось, что антибиотические субстанции холоднокровного орга низма мидии при пониженной температуре лучше проявят свое действие. В дальней шем, однако, выяснилась малая эффективность указанной процедуры. В третьей,